DnaJC12 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-412707

Descripción general

DNAJC12 codifica DnaJC12, una cochaperona de dominio J que se asocia con la maquinaria de HSP70 para regular el plegamiento de proteínas y la proteostasis en el citosol y el retículo endoplásmico. Al estimular la actividad ATPasa de HSP70, DnaJC12 favorece la maduración y estabilidad de las proteínas cliente y ayuda a coordinar las respuestas celulares al estrés proteotóxico. Esta red de chaperonas se integra con las vías de ubiquitina–proteasoma y de degradación asociada al retículo endoplásmico (ERAD) para mantener el control de calidad proteico. La alteración de la función de DNAJC12 se ha vinculado con una homeostasis enzimática perturbada y con fenotipos neurometabólicos, lo que la hace relevante para estudiar la adaptación al estrés y las vías de maduración de proteínas en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DnaJC12 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DNAJC12 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DNAJC12 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DNAJC12 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DnaJC12.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DNAJC12 para la investigación de la señalización de DnaJC12, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DNAJC12 críticos para la función de DnaJC12
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DNAJC12 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DnaJC12 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DnaJC12 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DNAJC12. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DnaJC12 (h) y el plásmido HDR DnaJC12 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DNAJC12 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DNAJC12 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.