DnaJB3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420974

Panoramica

Dnajb3 codifica DnaJB3, un membro della famiglia di co-chaperoni Hsp40/DnaJ che collabora con Hsp70 per regolare il ripiegamento, il ripiegamento corretto e il destino delle proteine mal ripiegate. Attraverso la stimolazione dell’attività ATPasica di Hsp70 mediata dal suo dominio J, DnaJB3 contribuisce alla proteostasi cellulare e supporta vie di risposta allo stress legate al controllo qualità delle proteine. Questi processi si intersecano con le risposte allo stress del reticolo endoplasmatico e con meccanismi di rimozione proteolitica che influenzano la sopravvivenza cellulare in condizioni di stress proteotossico. Un’alterazione della funzione della rete di chaperoni è ampiamente rilevante in modelli di disfunzione metabolica e neurodegenerazione, in cui proteostasi compromessa e segnalazione di stress contribuiscono a fenotipi associati alla malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DnaJB3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Dnajb3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Dnajb3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Dnajb3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DnaJB3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Dnajb3 per lo studio della segnalazione di DnaJB3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Dnajb3 critici per la funzione di DnaJB3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Dnajb3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DnaJB3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DnaJB3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Dnajb3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DnaJB3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DnaJB3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Dnajb3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Dnajb3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.