DNA pol γ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422341
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- DNA pol γ O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico DNA pol γ, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:DNA pol γ Anticorpo (G-6): sc-390634
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
DNA pol γ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422341 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Polg codifica a DNA polimerase gama, a principal polimerase replicativa do DNA mitocondrial em células de camundongo, e é necessária para a replicação do mtDNA, o reparo e a manutenção da integridade do genoma mitocondrial. A DNA pol γ atua em conjunto com componentes do nucleoide mitocondrial e do reparo por excisão de bases para sustentar a fosforilação oxidativa, preservando o número de cópias e a fidelidade do mtDNA. A desregulação de Polg compromete a biogênese mitocondrial, eleva a carga de mutações no mtDNA e pode desencadear remodelamento metabólico e sinalização de estresse associados a alterações na homeostase redox. Polg é amplamente estudado em contextos de disfunção mitocondrial, incluindo neurodegeneração, miopatia e fenótipos associados ao envelhecimento decorrentes da estabilidade comprometida do genoma mitocondrial.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DNA pol γ (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Polg em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Polg, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Polg na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DNA pol γ.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Polg para a investigação da sinalização de DNA pol γ, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Polg críticos para a função DNA pol γ
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Polg para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo DNA pol γ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo DNA pol γ Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Polg. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo DNA pol γ Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR DNA pol γ (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Polg para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Polg definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.