DNA pol γ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422341

Panoramica

Polg codifica la DNA polimerasi gamma, la principale polimerasi replicativa del DNA mitocondriale nelle cellule murine, ed è necessaria per la replicazione del mtDNA, la riparazione e il mantenimento dell’integrità del genoma mitocondriale. La DNA pol γ agisce in concerto con il nucleoide mitocondriale e con i componenti della riparazione per escissione di basi per sostenere la fosforilazione ossidativa, preservando il numero di copie e la fedeltà del mtDNA. L’alterazione di Polg compromette la biogenesi mitocondriale, aumenta il carico di mutazioni del mtDNA e può innescare rimodellamento metabolico e segnali di stress collegati a un’omeostasi redox alterata. Polg è ampiamente studiato in contesti di disfunzione mitocondriale, inclusi neurodegenerazione, miopatia e fenotipi associati all’invecchiamento guidati da una stabilità compromessa del genoma mitocondriale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DNA pol γ (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Polg in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Polg insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Polg a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DNA pol γ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Polg per lo studio della segnalazione di DNA pol γ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Polg critici per la funzione di DNA pol γ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Polg per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DNA pol γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DNA pol γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Polg. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DNA pol γ Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DNA pol γ (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Polg per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Polg definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.