DNA pol ε A Plasmide Double Nickase (m): sc-422339-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DNA pol ε A Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DNA pol ε A Double Nickase Plasmid (m) e il DNA pol ε A Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Pole. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DNA pol ε A Antibody (3C5.1): sc-12728
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DNA pol ε A Plasmide Double Nickase (m) | sc-422339-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Pole codifica la subunità catalitica A della DNA polimerasi epsilon, una polimerasi replicativa ad alta fedeltà essenziale per la sintesi del filamento guida del DNA durante la fase S. La DNA pol ε A si coordina con l’elicasi CMG e con i complessi dei fattori di replicazione per sostenere l’avanzamento del replisoma, il coordinamento del processamento dei frammenti di Okazaki e una duplicazione accurata del genoma. Oltre alla replicazione, Pole contribuisce alla tolleranza al danno del DNA e alle risposte allo stress replicativo, interfacciandosi con le vie di segnalazione dei checkpoint che preservano la stabilità della forcella replicativa. L’alterazione della funzione delle polimerasi replicative è strettamente associata a fenotipi di instabilità genomica, ampiamente utilizzati per modellare i processi mutazionali e i difetti di replicazione del DNA rilevanti per il cancro nei sistemi sperimentali.
DNA pol ε A Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pole nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pole. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pole. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pole interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.