DNA pol δ 4 Plasmide Double Nickase (h): sc-408268-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DNA pol δ 4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il DNA pol δ 4 Double Nickase Plasmid (h) e il DNA pol δ 4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira POLD4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DNA pol δ 4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-408268-NIC | 20 µg | $410.00 |
POLD4 codifica la subunità 4 della DNA polimerasi delta, un componente accessorio dell’oloenzima DNA polimerasi δ che supporta la replicazione cromosomica del DNA ad alta fedeltà e la sintesi del filamento ritardato. Attraverso interazioni all’interno del replisoma, la polimerasi δ coordina la processività dipendente da PCNA, la maturazione dei frammenti di Okazaki e la sintesi di riparazione del DNA durante la riparazione per escissione di basi e la riparazione dei disappaiamenti. Una corretta funzione di POLD4 contribuisce alla stabilità del genoma, alla tolleranza allo stress replicativo e alla progressione accurata del ciclo cellulare durante la fase S. La disregolazione delle subunità della polimerasi δ e delle vie associate alla replicazione è spesso oggetto di studio nelle ricerche su mutagenesi, instabilità cromosomica e fenotipi della risposta al danno al DNA associati al cancro.
DNA pol δ 4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus POLD4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di POLD4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di POLD4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con POLD4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.