DGAT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401735-NIC

DGAT1 codifica la diacilglicerolo O-aciltransferasi 1, un enzima associato al reticolo endoplasmatico che catalizza la fase terminale della sintesi dei triacilgliceroli a partire da diacilglicerolo e acil-CoA. Controllando la formazione di lipidi neutri e la biogenesi delle goccioline lipidiche, DGAT1 influenza l’accumulo energetico cellulare, le risposte alla lipotossicità e l’omeostasi dei lipidi di membrana, interfacciandosi con il metabolismo degli acidi grassi e con le vie dei glicerolipidi. L’attività di DGAT1 è rilevante per studi sulla regolazione metabolica in adipociti, epatociti ed epitelio intestinale, dove la gestione dei triacilgliceroli modella l’assorbimento dei nutrienti e la segnalazione lipidica. Alterazioni dell’espressione o della funzione di DGAT1 sono state investigate in contesti quali dislipidemia, insulino-resistenza, steatosi epatica e infiammazione guidata dai lipidi.

DGAT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DGAT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DGAT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DGAT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DGAT1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.