Delta-4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401271-ACT

ヒトDLL4は、膜結合型のNotchリガンドであるDelta-4をコードしており、隣接細胞間（ジャクスタクリン）シグナル伝達を介して、動脈の特異化、tip細胞／stalk細胞の運命決定、ならびに血管分岐の形態形成を制御する。DLL4–NOTCH相互作用は、血管新生スプラウティングと内皮細胞の静止状態（quiescence）を結び付ける転写プログラムを協調的に制御し、VEGFやその他の微小環境シグナルからの入力を統合する。DLL4の発現異常、またはシグナルのバランス破綻は、腫瘍血管新生をはじめとする血管関連病態において観察される異常な血管リモデリングや灌流状態の変化と関連している。経路上の結節点として、DLL4は内皮分化、細胞間コミュニケーション、文脈依存的な増殖制御への影響という観点から、しばしば研究対象となる。

Delta-4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性DLL4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Delta-4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における DLL4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はDLL4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Delta-4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のDLL4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるDelta-4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびDLL4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるDelta-4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。