Plasmide CRISPR d'Activation (m) Delta-3: sc-420011-ACT

Le gène murin Dll3 code Delta-3, un ligand atypique de la famille Notch qui module principalement la signalisation des récepteurs Notch au cours du développement embryonnaire et de la mise en place des tissus. Delta-3 est enrichi dans le mésoderme présomitique, où il contribue à l’horloge de segmentation et à la formation des frontières des somites via la régulation de la dynamique de la voie Notch et l’inhibition latérale. En façonnant les décisions de destinée cellulaire et les programmes de différenciation, Dll3 influence les lignages neurogéniques et myogéniques ainsi que des processus morphogénétiques plus larges. Une signalisation Notch associée à DLL3 dérégulée a été liée à des anomalies du développement et est fréquemment utilisée comme marqueur de recherche en biologie des tumeurs neuroendocrines, soutenant des études mécanistiques du contrôle de la voie.

Delta-3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Dll3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Delta-3 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Dll3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Dll3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Delta-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Dll3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Delta-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Delta-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de Dll3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.