Plásmido Doble Nickase (h) DDIT3/CHOP/GADD153: sc-400051-NIC

DDIT3 codifica el factor de transcripción CHOP (GADD153), una proteína bZIP inducible por estrés que forma heterodímeros con miembros de la familia C/EBP para reprogramar la expresión génica durante el estrés celular. CHOP es un efector central de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR), al integrar la señalización PERK–eIF2α–ATF4 para regular la apoptosis, el control redox y la proteostasis bajo estrés del retículo endoplásmico. Más allá del estrés del RE, DDIT3 participa en vías de la respuesta integrada al estrés vinculadas a la privación de nutrientes, el estrés oxidativo y señales inflamatorias, influyendo en decisiones de destino celular y programas de diferenciación. La actividad desregulada de CHOP se ha implicado en disfunción metabólica, modelos de neurodegeneración, lesión tisular inflamatoria y contextos oncogénicos, incluida la fusión FUS-DDIT3 asociada al liposarcoma mixoide, lo que convierte a DDIT3 en un nodo clave para estudios mecanísticos de redes transcripcionales adaptativas al estrés.

DDIT3/CHOP/GADD153 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DDIT3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DDIT3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DDIT3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DDIT3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.