DDI2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-427193

Panoramica

Il gene murino Ddi2 (DNA damage-inducible 1 homolog 2) codifica una proteasi aspartica implicata nel controllo della qualità delle proteine e nella segnalazione della risposta allo stress, con ruoli descritti nell’elaborazione e nella regolazione di programmi trascrizionali legati alla funzione del proteasoma. L’attività di DDI2 è connessa alla dinamica del sistema ubiquitina–proteasoma e all’adattamento cellulare allo stress proteotossico, influenzando il turnover di proteine ripiegate in modo errato o danneggiate. Attraverso questi processi, DDI2 può modulare vie che regolano la progressione del ciclo cellulare, l’apoptosi e la stabilità del genoma in condizioni di stress. La deregolazione della proteostasi e della segnalazione dello stress è rilevante per meccanismi studiati nella neurodegenerazione, nell’infiammazione e nella biologia dei tumori, rendendo Ddi2 un locus utile per l’analisi delle vie di segnalazione in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DDI2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ddi2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ddi2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ddi2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DDI2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ddi2 per lo studio della segnalazione di DDI2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ddi2 critici per la funzione di DDI2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ddi2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DDI2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal DDI2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ddi2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DDI2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR DDI2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ddi2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ddi2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.