DCAMKL1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402160-NIC

DCLK1 (DCAMKL1) codifica una chinasi serina/treonina associata ai microtubuli che integra il legame ai microtubuli di tipo doublecortin-like con la segnalazione chinasica per regolare la dinamica del citoscheletro, la migrazione neuronale e la crescita dei neuriti. In contesti epiteliali, DCLK1 è stato utilizzato come marcatore delle cellule tuft ed è associato a programmi che governano il destino cellulare, la motilità e la segnalazione adattativa allo stress. Tra le associazioni di via riportate figurano il rimodellamento dei microtubuli, la segnalazione correlata a MAPK e la regolazione di stati trascrizionali accoppiati alla differenziazione. Un’espressione deregolata di DCLK1 è stata descritta in molteplici tipi di tumori e in contesti infiammatori, a supporto della ricerca sui meccanismi di fenotipi simili alle cellule staminali, invasione e interazioni con il microambiente, senza implicare esiti clinici.

DCAMKL1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DCLK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DCLK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DCLK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DCLK1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.