Partículas Lentivirales de Activación (h2) DARPP-32: sc-400430-LAC-2
- Especies Diana: human
- 200 µl de Partículas Lentivirales de Activación CRISPR/dCas listas para usar
- Partículas Lentivirales de Acitvación (h2) DARPP-32 es un sistema de activación de la trascripción por mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen determinado a través de la tranducción lentiviral de las células
- Partículas Lentivirales de Acitvación (h2) DARPP-32 incluyen los siguientes elementos activadores SAM: plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada, (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y un plásmido que codifica la secuencia de diana específica de 20 nt de ARN. También contienen genes de resistencia a blasticidina, higromicina y puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación génica
- Los gRNA codificados por el DARPP-32 Plásmido de activación lentiviral (h2) y el DARPP-32 Plásmido de activación lentiviral (h22) se dirigen a regiones reguladoras distintas del promotor PPP1R1B. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia de la activación génica puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DARPP-32 Anticuerpo (H-3): sc-271111
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Partículas Lentivirales de Activación (h2) DARPP-32 | sc-400430-LAC-2 | 200 µl | $455.00 |
El gen humano PPP1R1B codifica DARPP-32 (fosfoproteína de 32 kDa regulada por dopamina y AMPc), un integrador clave de señales en las neuronas espinosas medianas que vincula las entradas dopaminérgicas y glutamatérgicas con la regulación de la fosfatasa de proteínas 1 (PP1). Tras la fosforilación dependiente de PKA, DARPP-32 inhibe PP1 para modular redes de fosforilación aguas abajo que controlan la plasticidad sináptica, la excitabilidad neuronal y los programas de transcripción dentro de las vías de AMPc/PKA y de los receptores de dopamina, mientras que estados alternativos de fosforilación se acoplan a la calcineurina y a otras quinasas. Las alteraciones en la señalización de PPP1R1B/DARPP-32 se han asociado con fenotipos neuropsiquiátricos y neurodegenerativos, así como con una señalización oncogénica desregulada en ciertos contextos tumorales, lo que refleja su amplio papel en el control del estado celular dependiente de la fosforilación. La edición génica de PPP1R1B facilita estudios mecanísticos de la transducción de señales mediada por dopamina, del equilibrio fosfatasa/quinasa y del análisis de vías en modelos neuronales y sistemas celulares relevantes para enfermedades.
Las partículas de activación lentiviral DARPP-32 (h2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PPP1R1B en una gama más amplia de tipos de células humanas.
Las partículas de activación lentiviral DARPP-32 (h2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PPP1R1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de DARPP-32. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PPP1R1B y la arquitectura reguladora.
El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.