DACH1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404712-ACT

DACH1 (fator de transcrição 1 da família Dachshund) codifica um regulador nuclear de ligação ao DNA que modula programas de padronização do desenvolvimento e decisões de destino celular ao coordenar redes transcricionais. Em células humanas, o DACH1 influencia a proliferação, a diferenciação e o estado epitelial–mesenquimal por meio de interações com a sinalização de receptores hormonais e com complexos regulatórios associados à cromatina, afetando vias que governam a progressão do ciclo celular e o comprometimento de linhagem. A expressão ou atividade desregulada de DACH1 tem sido associada a alterações na homeostase tecidual e a fenótipos ligados a tumores em múltiplos contextos de câncer, nos quais pode afetar a invasão, o controle de crescimento e programas transcricionais. Como um nó de via que integra a transcrição do desenvolvimento com a sinalização oncogênica, DACH1 é frequentemente investigado em estudos de regulação transcricional, plasticidade celular e reconfiguração de redes gênicas dependente do contexto.

DACH1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DACH1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DACH1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DACH1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DACH1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DACH1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DACH1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DACH1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DACH1 em células tumorais com expressão de DACH1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.