D2DR/Dopamine D2 Receptor Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400235-LAC

DRD2 codifica il recettore umano della dopamina D2 (D2DR), un GPCR accoppiato a Gi/o che modula la neurotrasmissione inibendo l’adenilil ciclasi, riducendo la segnalazione cAMP/PKA e regolando l’attività dei canali ionici. D2DR attiva anche la segnalazione dipendente da β-arrestina e cascate chinasi come ERK/MAPK e Akt/GSK3, contribuendo a modellare la plasticità sinaptica e l’eccitabilità neuronale. La segnalazione del recettore influenza la funzione dei circuiti dopaminergici e il controllo di feedback presinaptico del rilascio di dopamina, con effetti a valle sui programmi trascrizionali e sul metabolismo cellulare. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di DRD2 sono state implicate in contesti di ricerca neuropsichiatrica e neurodegenerativa, supportando studi sulla regolazione del recettore, sul bias di via di segnalazione e su fenotipi a livello di rete.

Le particelle di attivazione lentivirale D2DR/Dopamine D2 Receptor (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di DRD2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale D2DR/Dopamine D2 Receptor (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione DRD2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di D2DR/Dopamine D2 Receptor. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo DRD2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.