Cytokeratin 4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401893-ACT

KRT4はサイトケラチン4をコードしており、サイトケラチン4はII型中間径フィラメントタンパク質です。非角化性の重層上皮（口腔粘膜や食道粘膜など）において、I型ケラチンとヘテロ二量体を形成し、ケラチンフィラメントネットワークを構築します。この細胞骨格の足場は、上皮の機械的完全性、細胞間接着の構築・維持、ならびにケラチンのターンオーバー、プロテオスタシス、ストレス応答性シグナル伝達と連動した分化プログラムを支えます。KRT4の発現やフィラメントの組み立てが変化すると、上皮バリア機能や組織構築が乱れる可能性があり、粘膜恒常性、刺激に伴うリモデリング、上皮異形成の研究において重要な分子として位置づけられます。分化と関連する構造遺伝子として、KRT4は上皮系譜追跡や転写制御解析における分子リードアウトとしてもしばしば用いられます。

Cytokeratin 4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性KRT4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Cytokeratin 4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における KRT4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はKRT4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Cytokeratin 4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のKRT4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCytokeratin 4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびKRT4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCytokeratin 4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。