CYP2A6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403448

Descripción general

CYP2A6 codifica una monooxigenasa humana del citocromo P450 que cataliza el metabolismo oxidativo de una variedad de xenobióticos y de determinados sustratos endógenos, contribuyendo a la homeostasis química celular y al equilibrio redox. Como hemoproteína localizada en el retículo endoplásmico, CYP2A6 actúa dentro de las vías de metabolismo de fármacos de fase I y coopera con la NADPH–citocromo P450 reductasa para facilitar la transferencia de electrones durante la oxidación de sustratos. Las variaciones en la expresión o la actividad de CYP2A6 pueden modificar el flujo metabólico e influir en la susceptibilidad a la toxicidad inducida por sustancias químicas y a la activación de carcinógenos, lo que la hace relevante para estudios de diversidad farmacogenómica y de mecanismos de enfermedad relacionados con la exposición. Su enriquecimiento hepático y su regulación inducible también favorecen la investigación del control transcripcional, la estabilidad enzimática y las respuestas adaptativas frente a sustancias químicas ambientales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CYP2A6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CYP2A6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CYP2A6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CYP2A6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CYP2A6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CYP2A6 para la investigación de la señalización de CYP2A6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CYP2A6 críticos para la función de CYP2A6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CYP2A6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CYP2A6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CYP2A6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CYP2A6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CYP2A6 (h) y el plásmido HDR CYP2A6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CYP2A6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CYP2A6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.