Plasmide Double Nickase (h) CYP27B1: sc-401155-NIC

CYP27B1 code la 25‑hydroxyvitamine D‑1α‑hydroxylase mitochondriale, l’enzyme clé qui convertit la 25‑hydroxyvitamine D en l’hormone active 1,25‑dihydroxyvitamine D (calcitriol). En contrôlant l’abondance du calcitriol, CYP27B1 régule les programmes de signalisation du récepteur de la vitamine D (VDR) qui influencent l’homéostasie du calcium et du phosphate, la minéralisation osseuse, ainsi que de vastes réseaux transcriptionnels dans les cellules immunitaires et épithéliales. Son activité relie le métabolisme des stérols à la signalisation endocrinienne et aux processus d’oxydo‑réduction mitochondriaux, avec des effets en aval sur la différenciation, le tonus inflammatoire et la biologie des barrières. Une expression ou une fonction dérégulée de CYP27B1 est associée à des troubles du métabolisme de la vitamine D et a été étudiée dans des contextes incluant des phénotypes squelettiques, la susceptibilité auto‑immune, l’inflammation chronique et une signalisation altérée du microenvironnement tumoral.

CYP27B1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYP27B1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYP27B1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYP27B1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYP27B1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.