Plasmide Double Nickase (h) CYP17A1: sc-401918-NIC

CYP17A1 code le cytochrome P450 17A1, une monooxygénase microsomale qui catalyse les réactions 17α-hydroxylase et 17,20-lyase, essentielles à la stéroïdogenèse. En convertissant la prégnénolone et la progestérone en intermédiaires 17‑hydroxylés, puis en générant la déhydroépiandrostérone et l’androstènedione, CYP17A1 contribue à réguler le flux au sein des voies de biosynthèse des glucocorticoïdes et des stéroïdes sexuels. Son activité s’intègre au transfert d’électrons assuré par la P450 oxydoréductase dans le réticulum endoplasmique et influence les boucles de rétrocontrôle endocrinien qui gouvernent la production d’hormones surrénaliennes et gonadiques. Une dysrégulation de la fonction ou de l’expression de CYP17A1 est impliquée dans des phénotypes de déséquilibre des hormones stéroïdiennes et constitue un point d’entrée mécanistique pour étudier la signalisation liée au métabolisme dans des modèles de maladies endocriniennes.

CYP17A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CYP17A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CYP17A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CYP17A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CYP17A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.