CRM1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400348-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CRM1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CRM1 Double Nickase Plasmid (h) e il CRM1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira XPO1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CRM1 Antibody (C-1): sc-74454
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CRM1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400348-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CRM1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400348-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
XPO1 codifica CRM1, un recettore di esportazione nucleare dipendente da RanGTP che riconosce segnali di esportazione nucleare ricchi di leucina e media il trasporto direzionale di proteine e di alcuni RNA selezionati attraverso il complesso del poro nucleare. L’esportazione dipendente da CRM1 regola la localizzazione subcellulare di importanti regolatori della trascrizione, della progressione del ciclo cellulare, delle risposte allo stress e della segnalazione immunitaria innata, integrandosi con la dinamica del ciclo di Ran e con le vie di trasporto nucleare. Un’attività di CRM1 deregolata altera il traffico nucleo–citoplasmatico di oncosoppressori e fattori di segnalazione, e una funzione alterata di XPO1/CRM1 è stata associata a programmi oncogenici, interazioni ospite–patogeno di origine virale e meccanismi di malattie neurodegenerative. Queste caratteristiche rendono XPO1 un nodo centrale per lo studio del controllo del trasporto nucleo-citoplasmatico e dei suoi effetti a valle sull’espressione genica e sulla proteostasi.
CRM1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus XPO1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di XPO1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di XPO1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con XPO1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.