Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CRF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400770
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CRF Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CRF, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CRF Antibody (2B11): sc-293187
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CRF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-400770 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
L’ormone di rilascio della corticotropina (CRH) codifica il neuropeptide CRF, un regolatore centrale dell’asse ipotalamo–ipofisi–surrene (HPA) che coordina le risposte endocrine, autonome e comportamentali allo stress fisiologico. Una volta secreto, il CRF segnala principalmente attraverso CRHR1/CRHR2 per attivare le vie Gs–adenilil ciclasi–cAMP/PKA, modulando la trascrizione dipendente da CREB e gli output neuroendocrini a valle, inclusa la liberazione di ACTH. L’attività di CRH/CRF interagisce anche con la segnalazione infiammatoria e metabolica, influenzando la produzione di citochine e l’omeostasi energetica nel cervello e nei tessuti periferici. Un’espressione alterata di CRH o una segnalazione disfunzionale dei recettori del CRF sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici legati allo stress e a disturbi infiammatori e gastrointestinali, rendendo questo sistema rilevante per studi meccanicistici sul dialogo tra stress e sistema immunitario.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CRF (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CRH in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CRH insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CRH a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CRF.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CRH per lo studio della segnalazione di CRF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CRH critici per la funzione di CRF
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CRH per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CRF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CRF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CRH. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CRF Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CRF (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CRH per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CRH definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.