copine 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406621

Panoramica

CPNE1 codifica la copina 1, una proteina legante i fosfolipidi in modo Ca²⁺-dipendente, contenente domini C2 e un dominio A che favorisce il reclutamento alla membrana e le interazioni proteina–proteina in risposta ai segnali del Ca²⁺. La copina 1 è stata implicata nel coordinamento del traffico di membrana, del rimodellamento del citoscheletro e della trasduzione del segnale, collegando i flussi di calcio a interazioni spazialmente ristrette sulla membrana plasmatica e nei compartimenti endomembranosi. Tra le connessioni funzionali riportate figurano la modulazione della segnalazione associata ai recettori e delle risposte allo stress cellulare, con effetti a valle su programmi di proliferazione, migrazione e differenziamento. Un’espressione o attività deregolata di CPNE1 è stata associata alla biologia tumorale e ad altri disturbi in cui l’alterazione della segnalazione del calcio e delle dinamiche di membrana contribuisce a fenotipi patogeni, rendendola rilevante per studi meccanicistici in modelli di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO copine 1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CPNE1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CPNE1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CPNE1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina copine 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CPNE1 per lo studio della segnalazione di copine 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CPNE1 critici per la funzione di copine 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CPNE1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal copine 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal copine 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CPNE1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal copine 1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR copine 1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CPNE1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CPNE1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.