COPA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404020-ACT

COPA codifica a subunidade alfa do complexo coatômero I (COPI), um mediador central do tráfego vesicular entre o aparelho de Golgi e o retículo endoplasmático e no interior das cisternas do Golgi. Ao sustentar o transporte retrógrado e a triagem de cargas, COPA contribui para a manutenção da homeostase de organelas, o processamento de proteínas e a integridade da via secretora. O tráfego dependente de COPA se conecta a respostas celulares ao estresse, incluindo o estresse do RE e a sinalização da resposta a proteínas mal dobradas (UPR), e influencia a sinalização imune e inflamatória por meio de efeitos sobre a localização de proteínas. Alterações genéticas em COPA têm sido associadas à desregulação imune e a fenótipos de doenças inflamatórias, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos de transporte intracelular e imunobiologia.

COPA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de COPA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

COPA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus COPA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição COPA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de COPA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus COPA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de COPA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via COPA em células tumorais com expressão de COPA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.