connexin 37 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420559

Panoramica

Il gene murino Gja4 codifica la connessina 37 (Cx37), una proteina delle gap junction che si assembla in canali intercellulari, consentendo lo scambio diretto di ioni e piccoli metaboliti per coordinare l’omeostasi tissutale. Cx37 contribuisce alla segnalazione dipendente dal contatto che modella il comportamento di endotelio e muscolatura liscia, con ruoli nello sviluppo vascolare, nella regolazione della barriera e nella meccanotrasduzione. Attraverso la comunicazione intercellulare mediata da gap junction, influenza processi quali controllo del ciclo cellulare, migrazione e segnalazione infiammatoria. Alterazioni della funzione della connessina 37 sono state associate a disfunzione vascolare e a fenotipi rilevanti in ambito cardiovascolare, a supporto del suo impiego in modelli di angiogenesi, vie correlate alla trombosi e crosstalk immuno‑vascolare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO connexin 37 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gja4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gja4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gja4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina connexin 37.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gja4 per lo studio della segnalazione di connexin 37, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Gja4 critici per la funzione di connexin 37
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gja4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal connexin 37 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal connexin 37 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gja4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal connexin 37 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR connexin 37 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gja4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gja4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.