COL6A2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403209

Panoramica

COL6A2 codifica la catena α2 del collagene VI, un componente microfibrillare della matrice extracellulare (ECM) che si assembla con COL6A1 e COL6A3 per formare filamenti “a collana di perle” nei tessuti connettivi. Il collagene VI contribuisce all’organizzazione della ECM, all’adesione cellula–matrice e alla meccanotrasduzione, influenzando l’architettura del citoscheletro e vie di segnalazione quali integrina/FAK, MAPK e programmi di rimodellamento associati a TGF-β. Attraverso questi processi, COL6A2 aiuta a regolare l’integrità tissutale e le risposte allo stress cellulare in fibroblasti, miociti e altri tipi di cellule stromali. L’alterazione patogena dell’assemblaggio del collagene VI è collegata a malattie ereditarie neuromuscolari e del tessuto connettivo, rendendo COL6A2 un bersaglio rilevante per modellare fenotipi guidati dalla ECM.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO COL6A2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene COL6A2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del COL6A2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto COL6A2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina COL6A2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di COL6A2 per lo studio della segnalazione di COL6A2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni COL6A2 critici per la funzione di COL6A2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di COL6A2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal COL6A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal COL6A2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus COL6A2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal COL6A2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR COL6A2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia COL6A2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio COL6A2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.