COL6A2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403209-ACT

COL6A2 kodiert die α2-Kette von Kollagen Typ VI, einem Protein der extrazellulären Matrix, das sich zu perlschnurartigen Mikrofibrillen zusammenlagert und dabei hilft, die perizelluläre Matrix in Bindegeweben zu organisieren. Durch Interaktionen mit anderen Kollagenen, Proteoglykanen und Zelloberflächenrezeptoren trägt COL6A2 zum Matrixumbau, zur Zelladhäsion und zur Mechanotransduktion bei, die Überlebens- und Differenzierungsprogramme beeinflussen. Seine Funktion überschneidet sich mit Signalwegen der extrazellulären Matrix–Rezeptor-Kommunikation und der Regulation des Zytoskeletts und prägt Prozesse wie Fibrose, Gewebeintegrität und stromale Organisation. Eine veränderte COL6A2-Expression oder Matrixablagerung wird mit der Biologie von Bindegewebs- und neuromuskulären Erkrankungen in Verbindung gebracht und häufig im Kontext des Umbaus der Tumormikroumgebung sowie fibrotischer Signalwege untersucht.

COL6A2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen COL6A2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

COL6A2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des COL6A2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der COL6A2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen COL6A2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native COL6A2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von COL6A2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des COL6A2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem COL6A2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.