COL3A1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419742-ACT

O Col3a1 de camundongo codifica a proteína fibrilar da matriz extracelular COL3A1 (colágeno tipo III), um importante componente estrutural dos tecidos conjuntivos que confere resistência à tração e elasticidade aos tecidos. A COL3A1 é produzida principalmente por fibroblastos e outras células mesenquimais e é incorporada à fibrilogênese do colágeno juntamente com outros colágenos intersticiais, moldando a organização da matriz e a sinalização biomecânica. Sua expressão é regulada durante o desenvolvimento e em resposta a lesões, nas quais contribui para o reparo de feridas, a remodelação do estroma e a deposição de matriz extracelular fibrótica. A atividade desregulada de Col3a1 é frequentemente investigada em modelos de fibrose, anormalidades vasculares e dérmicas do tecido conjuntivo e remodelação do estroma associada a tumores.

COL3A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Col3a1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

COL3A1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Col3a1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Col3a1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de COL3A1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Col3a1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de COL3A1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via COL3A1 em células tumorais com expressão de Col3a1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.