coilin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400927-ACT

Il gene umano **COIL** codifica la coilina, una proteina impalcatura caratteristica dei corpi di Cajal che coordina l’assemblaggio e la maturazione delle ribonucleoproteine nucleari piccole (snRNP) e nucleolari piccole (snoRNP), supportando lo splicing del pre‑mRNA e il processamento dell’RNA. La coilina interagisce con componenti dello spliceosoma e guida il traffico di complessi RNA‑proteina tra sottodomini nucleari, collegando l’architettura nucleare alla regolazione dell’espressione genica. Attraverso queste funzioni, **COIL** contribuisce a vie che governano il metabolismo dell’RNA, la biogenesi dei ribosomi e l’organizzazione nucleare accoppiata al ciclo cellulare. Alterazioni nella localizzazione della coilina o nell’integrità dei corpi di Cajal sono state osservate in condizioni di stress cellulare e di trasformazione maligna, rendendo **COIL** un bersaglio utile per studi meccanicistici sui corpi nucleari e sulla regolazione del trascrittoma.

coilin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di COIL senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

coilin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus COIL nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione COIL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di coilin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus COIL nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da coilin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via coilin nelle cellule tumorali con espressione di COIL silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.