Cofilin 1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400394-NIC

CFL1 codifica la cofilina 1 umana, una proteina chiave legante l'actina che accelera il taglio e la depolimerizzazione dei filamenti di actina, mantenendo un rapido turnover dell'actina. Collegando il rimodellamento del citoscheletro ai segnali a monte provenienti dalle GTPasi della famiglia Rho e da chinasi come LIMK e TESK, la cofilina 1 contribuisce a coordinare la dinamica dei lamellipodi, l'endocitosi, la citochinesi e la polarità cellulare. L'attività di CFL1 è regolata in modo stringente dallo stato di fosforilazione e dalle interazioni con i fosfoinositidi, mettendo in relazione la riorganizzazione dell'actina con la segnalazione e il traffico di membrana. In letteratura, una disregolazione della dinamica dell'actina che coinvolge CFL1 è stata associata a fenotipi alterati di migrazione e invasione cellulare, nonché a processi neuronali e di risposta allo stress rilevanti per molteplici ambiti di ricerca sulle malattie.

Cofilin 1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CFL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CFL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CFL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CFL1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.