Plásmido CRISPR de Activación (h) Cofilin 1: sc-400394-ACT

CFL1 codifica la cofilina 1, un regulador central del recambio de los filamentos de actina que se une a la actina filamentosa (F-actina) y promueve el corte y la despolimerización para favorecer una rápida remodelación del citoesqueleto. Su actividad está estrechamente controlada por señales dependientes de fosforilación y por vías reguladoras aguas arriba como Rho GTPasa–LIMK–SSH, coordinando la formación de lamelipodios, la polaridad celular, la citocinesis y la endocitosis. Al modular la dinámica de la actina, la cofilina 1 influye en la migración celular, la adhesión y la mecanotransducción, procesos que con frecuencia se ven alterados en la invasión y metástasis del cáncer, así como en contextos cardiovasculares e inflamatorios. La desregulación de la señalización de cofilina y de la remodelación de la actina también se ha vinculado a fenotipos neurodegenerativos, incluidas agregaciones anómalas de actina–cofilina descritas en modelos de disfunción sináptica.

Cofilin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CFL1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cofilin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CFL1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CFL1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cofilin 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CFL1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cofilin 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cofilin 1 en células tumorales con expresión de CFL1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.