CLIP4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-413231-ACT

CLIP4 (CAP-Gly domain containing linker protein 4) codifica un fattore associato al citoscheletro implicato nella regolazione della dinamica dei microtubuli e dell’organizzazione intracellulare attraverso interazioni con la tubulina e con le reti del versante “plus-end” dei microtubuli. Influenzando la stabilità dei microtubuli e il coordinamento spaziale del citoscheletro, CLIP4 può incidere su processi quali il traffico vescicolare, la polarità cellulare e la progressione mitotica. Un’espressione alterata o un controllo citoscheletrico deregolato sono comunemente associati a migrazione cellulare aberrante e fenotipi proliferativi, rendendo CLIP4 un bersaglio rilevante per studi meccanicistici in biologia del cancro e in altri disturbi che coinvolgono il rimodellamento del citoscheletro. La ricerca su CLIP4 supporta inoltre l’indagine sul cross-talk tra la regolazione dei microtubuli e i programmi di segnalazione che modulano forma cellulare e adesione.

CLIP4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CLIP4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CLIP4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CLIP4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CLIP4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CLIP4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CLIP4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CLIP4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CLIP4 nelle cellule tumorali con espressione di CLIP4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.