Partículas Lentivirales de Activación (h) CLEC-2D: sc-412035-LAC

CLEC2D codifica CLEC-2D, un ligando de tipo lectina C que se une al receptor inhibidor KLRB1/CD161 en células NK y en subpoblaciones de células T, contribuyendo a una regulación de la citotoxicidad y la producción de citocinas similar a la de los puntos de control inmunitarios. Al modular el diálogo cruzado entre células NK y T en la superficie celular, CLEC-2D influye en el reconocimiento inmunitario dentro de microambientes inflamatorios y asociados a tumores, y puede afectar las respuestas al estrés celular. La expresión alterada de CLEC2D se ha asociado con fenotipos de evasión inmunitaria e inflamación tisular desregulada, lo que la hace relevante para estudios de inmunovigilancia, tolerancia y programas de activación de leucocitos. La función de CLEC-2D se investiga comúnmente en contextos que vinculan la señalización ligando–receptor con cambios transcripcionales en células efectoras y en compartimentos presentadores de antígeno o estromales.

Las partículas de activación lentiviral CLEC-2D (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CLEC2D en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CLEC-2D (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CLEC2D, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CLEC-2D. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CLEC2D y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.