CLC-6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405938

Übersicht

CLCN6 kodiert den intrazellulären Chlorid/Protonen-Austauscher CLC-6, ein Mitglied der CLC-Familie, das überwiegend an endosomalen und lysosomalen Membranen lokalisiert ist und dort zur Ionhomöostase in Vesikeln beiträgt. Durch die Kopplung des Chloridtransports an Protonengradienten ist CLC-6 an der Regulation der Endosomenreifung, der lysosomalen Ansäuerung und von Membrantransportprozessen beteiligt, die die Proteinsortierung und den Proteinumsatz beeinflussen. Störungen dieser Signal- und Transportwege können die Physiologie von neuronalen und epithelialen Zellen verändern; zudem wurde genetische Variation in CLCN6 in Humanstudien mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und einer umfassenderen lysosomenbezogenen Dysfunktion in Verbindung gebracht. Entsprechend wird CLCN6 häufig im Kontext der Endolysosomen-Biologie, des Cargo-Recyclings und zellulärer Stressantworten untersucht, die mit einem veränderten Organellen-pH und Ionenhaushalt zusammenhängen.

Das CLC-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CLCN6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CLCN6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CLCN6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CLC-6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CLCN6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CLC-6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CLCN6-Exone abzielen, die für die CLC-6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CLCN6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CLC-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CLC-6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CLCN6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CLC-6 HDR-Plasmid (h) und CLC-6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CLCN6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CLCN6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.