claudin-1 Plasmide Double Nickase (m): sc-419682-NIC

Cldn1 codifica per la claudina-1, una proteina transmembrana a quattro passaggi delle tight junction (giunzioni serrate) che contribuisce a stabilire la funzione di barriera degli epiteli e degli endoteli regolando la permeabilità paracellulare e la polarità apico-basale. La claudina-1 partecipa all’assemblaggio e al rimodellamento delle tight junction tramite interazioni con proteine di impalcatura come ZO-1 ed è integrata in reti di segnalazione che coordinano la stabilità giunzionale, inclusa la fosforilazione dipendente da PKC e l’interazione con la via Wnt/β-catenina e con programmi correlati all’EMT. Nei tessuti murini, la claudina-1 è particolarmente evidente negli epiteli che formano barriere, dove i suoi livelli di espressione influenzano l’integrità delle giunzioni, la differenziazione e le risposte infiammatorie. Un’espressione alterata di CLDN1 è stata associata a disfunzioni di barriera e a fenotipi di progressione tumorale legati all’EMT e al potenziale metastatico, rendendola un bersaglio utile nei modelli di omeostasi epiteliale e nei meccanismi di malattia.

claudin-1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cldn1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cldn1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cldn1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cldn1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.