Plasmide CRISPR/Cas9 KO claudin-1 (h): sc-400609

Présentation

CLDN1 code la claudine‑1, un composant membranaire intégral des brins de jonctions serrées qui régule l’intégrité de la barrière épithéliale, la perméabilité paracellulaire et la polarité apico‑basale. La claudine‑1 participe à l’organisation des jonctions et à la signalisation via des interactions avec des protéines d’échafaudage telles que ZO‑1, influençant la dynamique du cytosquelette et des voies liées à l’homéostasie épithéliale, notamment Wnt/β‑caténine et des programmes associés à la TEM (transition épithélio‑mésenchymateuse). Des altérations de l’expression ou de la localisation de CLDN1 sont associées à des dysfonctions de barrière et à des processus inflammatoires, et ce gène est fréquemment étudié dans des contextes de transformation épithéliale, d’invasion et de métastases dans de nombreux carcinomes. En tant que déterminant jonctionnel, la claudine‑1 est largement utilisée comme marqueur et comme nœud mécanistique pour étudier la signalisation dépendante de l’adhésion et l’architecture tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO claudin-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CLDN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CLDN1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CLDN1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine claudin-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CLDN1 pour l'étude de la signalisation de claudin-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CLDN1 essentiels à la fonction de claudin-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CLDN1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le claudin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le claudin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CLDN1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le claudin-1 plasmide HDR (h) et le claudin-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CLDN1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CLDN1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.