Clathrin Light Chain B/CLTB Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404228-ACT

CLTB codifica la catena leggera B della clatrina, un componente fondamentale delle vescicole rivestite di clatrina che regola l’endocitosi mediata da recettore e il traffico intracellulare tra membrana plasmatica, endosomi e rete trans-Golgi. Modulando la dinamica del reticolo di clatrina insieme alla catena pesante della clatrina e a complessi adattatori come AP2, CLTB contribuisce alla selezione del carico, alla gemmazione delle vescicole e al riciclo delle vescicole sinaptiche in tipi cellulari specializzati. Questo asse di traffico influenza la durata della segnalazione e il turnover dei recettori, collegando i processi associati a CLTB all’omeostasi cellulare, alla proliferazione e alle risposte allo stress. Un traffico endocitico deregolato e il trasporto dipendente dalla clatrina sono spesso studiati nel contesto della neurobiologia, delle vie di ingresso virale e delle alterazioni della segnalazione dei recettori correlate al cancro.

Clathrin Light Chain B/CLTB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CLTB senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Clathrin Light Chain B/CLTB Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CLTB nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CLTB, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Clathrin Light Chain B/CLTB. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CLTB nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Clathrin Light Chain B/CLTB nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Clathrin Light Chain B/CLTB nelle cellule tumorali con espressione di CLTB silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.