CKR-7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419708

Panoramica

Ccr7 codifica per il recettore delle chemochine CKR-7 (CCR7), un GPCR che lega CCL19 e CCL21 per guidare la chemiotassi e fornire segnali posizionali a cellule T, cellule B e cellule dendritiche. La segnalazione di CCR7 attiva vie dipendenti da Gαi che influenzano il rimodellamento dell’actina, l’attivazione delle integrine e le vie MAPK/PI3K, supportando il traffico dei leucociti attraverso l’endotelio linfatico e gli organi linfoidi secondari. Nel topo, Ccr7 è centrale per la sorveglianza immunitaria, l’organizzazione dei tessuti linfoidi e la migrazione regolata delle cellule immunitarie durante l’infiammazione. Un traffico dipendente da CCR7 deregolato è spesso studiato in modelli di autoimmunità, infiammazione cronica e microambienti immunitari tumorali, in cui l’alterato homing cellulare può influenzare la progressione della malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CKR-7 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccr7 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccr7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccr7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CKR-7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccr7 per lo studio della segnalazione di CKR-7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccr7 critici per la funzione di CKR-7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccr7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CKR-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CKR-7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccr7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CKR-7 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CKR-7 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccr7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccr7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.