CKR-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419705

Panoramica

Ccr2 codifica per il recettore delle chemochine CKR-2 (CCR2), un GPCR a sette domini transmembrana che lega CCL2/MCP-1 e ligandi correlati per guidare la chemiotassi dei monociti e di altri sottotipi mieloidi. Dopo il legame del ligando, CKR-2 segnala attraverso vie dipendenti da Gαi per regolare le cascate PI3K/AKT e MAPK, il flusso di calcio, l’attivazione delle integrine e il rimodellamento del citoscheletro, modulando il traffico leucocitario e la polarizzazione infiammatoria. Nel topo, l’attività di Ccr2 è fondamentale per il reclutamento di monociti infiammatori nei siti di danno tissutale e infezione e influenza l’accumulo di macrofagi in diversi microambienti infiammatori. Una segnalazione deregolata dell’asse CCR2 è spesso studiata nell’infiammazione cronica, nella neuroinfiammazione e nella biologia mieloide associata ai tumori come fattore che promuove l’infiltrazione di cellule immunitarie e le reti citochiniche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CKR-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccr2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccr2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccr2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CKR-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccr2 per lo studio della segnalazione di CKR-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccr2 critici per la funzione di CKR-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccr2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CKR-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CKR-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccr2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CKR-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CKR-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccr2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccr2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.