CKR-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419705

Descripción general

Ccr2 codifica el receptor de quimiocinas CKR-2 (CCR2), un GPCR de siete dominios transmembrana que se une a CCL2/MCP-1 y a ligandos relacionados para dirigir la quimiotaxis de monocitos y otros subgrupos mieloides. Tras la unión del ligando, CKR-2 señaliza a través de vías dependientes de Gαi para regular las cascadas de PI3K/AKT y MAPK, el flujo de calcio, la activación de integrinas y la remodelación del citoesqueleto, modulando el tráfico leucocitario y la polarización inflamatoria. En el ratón, la actividad de Ccr2 es clave para el reclutamiento de monocitos inflamatorios a sitios de lesión tisular e infección, e influye en la acumulación de macrófagos en diversos microambientes inflamatorios. La señalización desregulada del eje CCR2 se estudia con frecuencia en la inflamación crónica, la neuroinflamación y la biología mieloide asociada a tumores como impulsor de la infiltración de células inmunitarias y de redes de citocinas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CKR-2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ccr2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ccr2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ccr2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CKR-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ccr2 para la investigación de la señalización de CKR-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ccr2 críticos para la función de CKR-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ccr2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CKR-2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CKR-2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ccr2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CKR-2 (m) y el plásmido HDR CKR-2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ccr2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ccr2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.