CKR-10 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407896

Descripción general

CCR10 codifica el receptor de quimiocinas CKR-10, un GPCR de siete dominios transmembrana que se une a los ligandos CCL27 y CCL28 para dirigir la quimiotaxis de leucocitos y el homing específico a tejidos. La señalización de CKR-10 activa proteínas G heterotriméricas para regular el flujo de calcio, las vías dependientes de MAPK y PI3K, la activación de integrinas y la remodelación del citoesqueleto, que en conjunto determinan la migración celular y su posicionamiento en las barreras epiteliales. Este receptor está implicado en la vigilancia inmunitaria y en programas de tráfico inflamatorio en piel y tejidos mucosos, donde las alteraciones de la actividad de CCR10 pueden modificar la composición local de células inmunitarias. Las redes de quimiocinas asociadas a CCR10 desreguladas se han estudiado en el contexto de la inflamación crónica y de la biología del microambiente tumoral, lo que respalda su relevancia como un nodo mecanístico para investigaciones centradas en la migración.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CKR-10 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CCR10 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CCR10 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CCR10 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CKR-10.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CCR10 para la investigación de la señalización de CKR-10, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CCR10 críticos para la función de CKR-10
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CCR10 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CKR-10 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CKR-10 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CCR10. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CKR-10 (h) y el plásmido HDR CKR-10 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CCR10 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CCR10 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.