CKR-10 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407896-ACT

CCR10 (CKR-10) é um receptor de quimiocinas da família dos GPCR que se liga aos ligantes CCL27 e CCL28 para regular o tráfego direcionado de leucócitos, o homing tecidual e o posicionamento de células imunes em barreiras epiteliais. Após a ligação do ligante, o CCR10 acopla-se a proteínas Gαi para modular a sinalização por segundos mensageiros e vias a jusante como PI3K/AKT e MAPK, influenciando a quimiotaxia, a dinâmica de adesão e as respostas de citocinas. O CCR10 é frequentemente estudado no contexto da imunologia da pele e das mucosas, onde contribui para a localização de linfócitos e para a formação de circuitos inflamatórios. A expressão desregulada de CCR10 tem sido associada à infiltração imune aberrante e à remodelação do microambiente tumoral, reforçando sua relevância em estudos de inflamação e biologia do câncer.

CKR-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCR10 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CKR-10 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCR10 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCR10, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CKR-10. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCR10 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CKR-10 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CKR-10 em células tumorais com expressão de CCR10 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.