CIRP Plasmide Double Nickase (h): sc-405185-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CIRP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CIRP Double Nickase Plasmid (h) e il CIRP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CIRBP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CIRP Antibody (1C9): sc-293325
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CIRP Plasmide Double Nickase (h) | sc-405185-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CIRP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405185-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La proteina legante l’RNA inducibile dal freddo (CIRP), codificata dal gene **CIRBP**, è uno chaperone dell’RNA sensibile allo stress che modula la stabilità dell’mRNA, la traduzione e la localizzazione subcellulare in risposta a ipotermia, irradiazione UV e stress ossidativo. CIRP partecipa a reti di regolazione post-trascrizionale che influenzano il controllo del ciclo cellulare, l’apoptosi e la segnalazione infiammatoria, inclusa la dinamica dei granuli di stress e, più in generale, le vie del metabolismo dell’RNA. Alterazioni dell’espressione o della localizzazione di **CIRBP** sono state associate a una deregolazione dell’adattamento allo stress e delle risposte immunitarie, con rilevanza per la biologia del cancro, la neuroinfiammazione e il danno cellulare correlato all’ischemia. In quanto proteina multifunzionale legante l’RNA, CIRP rappresenta un nodo sperimentale maneggevole per chiarire come lo stress ambientale rimodelli i programmi di espressione genica a livello di RNA.
CIRP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CIRBP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CIRBP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CIRBP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CIRBP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.