Plasmide Double Nickase (m) CIITA: sc-419390-NIC

La CIITA murine (class II, major histocompatibility complex, transactivator) est un régulateur transcriptionnel majeur qui contrôle l’expression des gènes du CMH de classe II et coordonne le traitement et la présentation des antigènes dans les cellules présentatrices d’antigènes professionnelles. CIITA intègre la signalisation dépendante de l’interféron‑γ à des programmes transcriptionnels qui façonnent l’activation de l’immunité adaptative, influençant l’amorçage des lymphocytes T CD4+ et la surveillance immunitaire. Une activité altérée de CIITA perturbe la dynamique d’expression du CMH II et a été associée à une dérégulation immunitaire et à des phénotypes inflammatoires, ce qui en fait une cible fréquemment utilisée pour étudier le contrôle transcriptionnel de la présentation antigénique. Les voies dépendantes de CIITA sont également pertinentes dans des modèles d’infection et d’immunologie tumorale, où la capacité de présentation des antigènes module la reconnaissance immunitaire.

CIITA Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ciita dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ciita. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ciita. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ciita.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.