CIDE-B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403808

Panoramica

CIDEB codifica CIDE-B, un membro della famiglia di proteine contenenti il dominio CIDE, coinvolta nella regolazione della dinamica delle goccioline lipidiche, dell’omeostasi energetica e di processi associati alla morte cellulare. Nei tessuti umani con un metabolismo lipidico attivo, CIDE-B contribuisce a vie che collegano l’immagazzinamento e il turnover dei lipidi neutri con la segnalazione metabolica, includendo il metabolismo lipidico epatico e programmi associati agli adipociti. Un’alterata espressione o funzione di CIDEB è stata associata ad accumulo lipidico disregolato e a fenotipi metabolici rilevanti per obesità, insulino-resistenza e meccanismi patologici legati alle malattie del fegato grasso. Di conseguenza, CIDEB è oggetto di studio per il suo ruolo nel coordinare la biologia delle goccioline lipidiche con le risposte allo stress e la funzione mitocondriale nelle cellule metabolicamente attive.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CIDE-B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CIDEB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CIDEB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CIDEB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CIDE-B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CIDEB per lo studio della segnalazione di CIDE-B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CIDEB critici per la funzione di CIDE-B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CIDEB per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CIDE-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CIDE-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CIDEB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CIDE-B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CIDE-B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CIDEB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CIDEB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.