CHD1 Double Nickase Plasmid (h): sc-404299-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CHD1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CHD1 Double-Nickase-Plasmid (h) und CHD1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHD1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CHD1: sc-271626
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CHD1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404299-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CHD1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404299-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHD1 (Chromodomain-Helikase-DNA-bindendes Protein 1) ist ein ATP-abhängiger Chromatin-Remodeler, der über seine Chromodomänen methylierte Histonmarkierungen erkennt und Nukleosomen repositioniert, um die Chromatinzugänglichkeit zu steuern. Es unterstützt die transkriptionelle Regulation, die Elongation durch RNA-Polymerase II sowie die Aufrechterhaltung von offenem Chromatin an aktiven Promotoren und in Genkörpern und ist damit mit Prozessen wie DNA-Replikation, DNA-Schadensantwort und Genomstabilität verknüpft. Die CHD1-Funktion überschneidet sich mit Signalwegen der Chromatinorganisation und epigenetischen Kontrolle, die Zellidentität und Differenzierungsprogramme beeinflussen. Eine veränderte CHD1-Aktivität oder ein veränderter genomischer Status wurde mit Transkriptionsfehlregulation und Genominstabilitäts-Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie und verwandte, durch Chromatin getriebene Krankheitsmechanismen relevant sind.
CHD1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHD1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHD1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHD1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHD1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.