CHD1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404299-ACT

CHD1 (proteína 1 de ligação ao DNA com helicase de cromodomínio) é um remodelador de cromatina dependente de ATP que reconhece nucleossomos metilados em H3K4 por meio de seus cromodomínios e modula o posicionamento dos nucleossomos para sustentar a regulação transcricional. Ele contribui para programas de expressão gênica associados à RNA polimerase II, para a acessibilidade da cromatina e para a coordenação da replicação e do reparo do DNA dentro da eucromatina. Por meio dessas atividades, CHD1 influencia a estabilidade do genoma e redes transcricionais específicas do estado celular, incluindo vias ligadas à diferenciação e às respostas ao estresse. Alterações na função ou na expressão de CHD1 têm sido associadas à desregulação do controle epigenético na biologia do câncer, tornando-o um alvo comum para estudos mecanísticos de transcrição e arquitetura da cromatina.

CHD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHD1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CHD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHD1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHD1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CHD1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHD1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CHD1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CHD1 em células tumorais com expressão de CHD1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.