CGRP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401165-ACT

ヒトCALCBは、カルシトニン遺伝子ファミリーに由来する神経ペプチドであるカルシトニン遺伝子関連ペプチド2（CGRP2）をコードしており、CGRP受容体複合体（CALCRLとRAMP1）を介してシグナルを伝達し、cAMP依存性経路を制御します。CGRP2は、血管拡張、血管緊張、および炎症性の神経原性シグナル伝達を調節することで神経・血管間コミュニケーションに寄与し、末梢組織における平滑筋や免疫細胞の応答にも影響を与え得ます。CGRPファミリーのシグナル伝達の破綻は、侵害受容処理や血管恒常性の変化と関連づけられており、CALCBは感覚神経の生物学、内皮—神経のクロストーク、ならびに炎症性疼痛機序の研究において重要な標的となります。がんやその他の慢性疾患では、神経ペプチドシグナルの変化が組織微小環境やストレス応答経路を形成し得るため、細胞—細胞コミュニケーションモデルにおけるCALCBの検討が支持されます。

CGRP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CALCBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CGRP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CALCB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCALCB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CGRP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCALCB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCGRP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCALCB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCGRP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。