cGAS Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403354-LAC

MB21D1 umano codifica la cyclic GMP-AMP sintasi (cGAS), un sensore citosolico del DNA che catalizza la sintesi di 2′3′-cGAMP per attivare STING (TMEM173) e, a valle, la segnalazione TBK1–IRF3 e NF-κB. Questa via coordina i programmi genici dell’interferone di tipo I e dell’infiammazione in risposta al DNA microbico, all’instabilità genomica e al DNA self mal localizzato proveniente da micronuclei o da stress mitocondriale. La segnalazione di cGAS interseca le risposte al danno del DNA, la regolazione della cromatina, l’autofagia e l’infiammazione associata alla senescenza, plasmando il tono dell’immunità innata nei diversi tessuti. Un’attività cGAS–STING deregolata è stata implicata in fenotipi autoinfiammatori, nel rimodellamento del microambiente immunitario tumorale e nella neuroinfiammazione, motivo per cui è frequentemente impiegata in studi meccanicistici sul riconoscimento degli acidi nucleici.

Le particelle di attivazione lentivirale cGAS (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MB21D1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale cGAS (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MB21D1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di cGAS. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MB21D1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.