CEP55 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-417522-LAC

La CEP55 (proteina centrosomiale 55) umana è un fattore regolato dal ciclo cellulare che si accumula ai centrosomi e al midbody durante la mitosi tardiva, dove coordina l’abscissione citochinetica e la corretta separazione delle cellule figlie. CEP55 interagisce con l’assemblaggio del midbody e con i processi di scissione di membrana dipendenti da ESCRT, collegando la dinamica del fuso mitotico al completamento della divisione cellulare. Un’espressione deregolata di CEP55 è frequentemente associata a proliferazione aberrante, instabilità cromosomica e alterazioni della progressione del ciclo cellulare, rendendola un nodo utile per studiare il controllo mitotico nel cancro e in altri contesti iperproliferativi. Inoltre, cambiamenti dipendenti da CEP55 possono influenzare reti di segnalazione che accoppiano la funzione del centrosoma al mantenimento del genoma e alle risposte di stress cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale CEP55 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CEP55 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale CEP55 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CEP55, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di CEP55. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CEP55 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.