Centrin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400867

Übersicht

CETN2 kodiert Centrin-2, ein konserviertes EF-Hand-Calciumbindungsprotein, das an Centrosomen und Basalkörperchen lokalisiert und zur Centriolenduplikation, zur Integrität des Centrosoms sowie zur Organisation der Spindel während der Zellteilung beiträgt. Centrin-2 ist außerdem an Aufbau und Funktion der primären Zilie beteiligt und verknüpft die CETN2-Aktivität damit mit der Zellzykluskontrolle und mikrotubulusbasierten Prozessen wie der Ziliogenese. Über seine Rollen in der Centrosomen-Homöostase und in ziliären Signalnetzwerken können veränderte Centrin-2-Dynamiken die genomische Stabilität und Programme der zellulären Differenzierung beeinflussen, die in der Krebsbiologie und bei Ziliopathien häufig gestört sind. CETN2 wird daher häufig als molekulares Werkzeug eingesetzt, um centrosomenassoziierte Signalwege, die mitotische Genauigkeit und zilienabhängige Signaloutputs in menschlichen Zellen zu untersuchen.

Das Centrin-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CETN2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CETN2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CETN2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Centrin-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CETN2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Centrin-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CETN2-Exone abzielen, die für die Centrin-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CETN2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Centrin-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Centrin-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CETN2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Centrin-2 HDR-Plasmid (h) und Centrin-2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CETN2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CETN2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.