CDYL Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-406624-ACT

Il CDYL (chromodomain Y-like) umano è un coregolatore associato alla cromatina che si lega alle lisine metilate sugli istoni e contribuisce al controllo epigenetico della trascrizione. Attraverso il suo cromodominio e un’attività simile a quella di una crotonil-CoA idratasi, CDYL può influenzare gli stati di crotonilazione e acetilazione degli istoni, favorendo la formazione di eterocromatina, la repressione trascrizionale e programmi genici dello sviluppo. CDYL partecipa a vie che regolano la differenziazione neuronale, lo sviluppo delle cellule germinali e il rimodellamento della cromatina legato al danno al DNA, a testimonianza del suo ruolo nel mantenimento di stati regolatori del genoma. Un’alterazione dell’espressione o della funzione di CDYL è stata associata a reti trascrizionali modificate, descritte in fenotipi di neurosviluppo e nella riprogrammazione epigenetica correlata al cancro, rendendolo rilevante per studi meccanicistici della regolazione genica dipendente dalla cromatina.

CDYL Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDYL senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CDYL Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDYL nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDYL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CDYL. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDYL nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CDYL nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CDYL nelle cellule tumorali con espressione di CDYL silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.