Cdk6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400309

Descripción general

CDK6 codifica la quinasa dependiente de ciclina 6 (Cdk6), una quinasa de serina/treonina que se asocia con ciclinas de tipo D para fosforilar proteínas de la familia RB y promover la progresión del ciclo celular de la fase G1 a la fase S. La actividad de Cdk6 integra la señalización mitogénica con el control de los puntos de control a través del eje ciclina D–CDK4/6–RB–E2F y se conecta con vías que regulan la proliferación, la diferenciación y la senescencia. La expresión o señalización desregulada de CDK6 se asocia con frecuencia a un control aberrante del ciclo celular en el cáncer y también se ha implicado en decisiones de linaje hematopoyético y en programas transcripcionales inflamatorios. Debido a su papel central en la coordinación de la entrada al ciclo celular, CDK6 se estudia ampliamente en biología tumoral, en la regulación de células madre/progenitoras y en mecanismos de resistencia terapéutica a nivel de vía.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Cdk6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CDK6 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CDK6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CDK6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Cdk6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CDK6 para la investigación de la señalización de Cdk6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de CDK6 críticos para la función de Cdk6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CDK6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Cdk6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Cdk6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CDK6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Cdk6 (h) y el plásmido HDR Cdk6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CDK6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CDK6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.